La cromatografía en capa fina es un método de análisis químico basado en el uso de una capa absorbente con un espesor de 0,1-0,5 mm como fase estacionaria. El método TLC se puede utilizar en varios campos y permite la determinación de una amplia variedad de compuestos químicos.
Principio del método
El método de la cromatografía en capa fina nació de la cromatografía en papel y los primeros experimentos se llevaron a cabo en los años 80 del siglo XIX. El uso activo de este análisis comenzó solo después de 1938.
La técnica de TLC incluye una fase móvil (eluyente), una fase estacionaria (sorbente) y un analito. La fase estacionaria se aplica y se fija en una placa especial. La placa puede estar hecha de vidrio, aluminio o plástico; estos son sustratos reutilizables que deben lavarse, secarse y prepararse a fondo para la aplicación del sorbente después de cada uso. También es posible utilizar platos de papel que se desechan después de su uso.
El gel de sílice se usa con mayor frecuencia como fase estacionaria, pero es posible usar otros sorbentes, por ejemplo, óxido de aluminio. Al usar este o aquel sorbente, la tecnología debe seguirse estrictamente para que el resultado sea preciso, por ejemplo, porque el gel de sílice puede dar un resultado incorrecto si el aire en el laboratorio es demasiado húmedo.
Se utilizan disolventes como fase móvil, por ejemplo, agua, ácido acético, etanol, acetona, benceno. La elección de un disolvente debe tomarse con responsabilidad, porque el resultado de la cromatografía depende directamente de sus cualidades (viscosidad, densidad, pureza). Se selecciona un disolvente individual para cada muestra analizada.
Análisis
La muestra debe diluirse en un disolvente. Si no se produce una disolución completa y quedan demasiadas impurezas, la muestra se puede limpiar mediante extracción.
La aplicación de la muestra a la placa se puede realizar de forma automática o manual. La aplicación automática utiliza un método de micropulverización en el que cada muestra se rocía en el área apropiada del sustrato. Para la aplicación manual, se utiliza una micropipeta. Se colocan marcas de lápiz en el plato para cada muestra. Cada muestra se aplica con un capilar a la placa en una línea a una distancia suficiente de las marcas para no reaccionar con el carbono del plomo.
La placa se coloca en un recipiente, en cuyo fondo se vierte el eluyente. El soporte se coloca con un borde en el recipiente hasta la línea marcada. El recipiente está bien cerrado para evitar la evaporación de la fase móvil. Bajo la acción de las fuerzas capilares, el eluyente comienza a subir por la capa absorbente. Cuando el eluyente alcanza un cierto nivel, la placa se retira del recipiente y se seca.
Si la sustancia deseada no tiene color, entonces no será visible en el sustrato. Por lo tanto, se realiza la visualización: procesamiento de la placa con vapor de yodo u otros tintes.
Después de dicho procesamiento, se evalúa el resultado. Aparecen áreas coloreadas de intensidad variable en el sorbente. Para determinar una sustancia (o un grupo de sustancias), las áreas coloreadas, su tamaño, intensidad y movilidad se comparan con una muestra de referencia.
El método TLC se usa ampliamente porque es rápido, económico, preciso, intuitivo, no requiere equipos complejos y es fácil de interpretar.
